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Antibodix离子交换柱使用手册
色谱柱信息
Antibodix离子交换柱特别针对抗体蛋白的分离而设计，该柱具有高分辨率、高柱效、高回收率的特点。填料基质为刚性、球形、高交联度的无孔聚苯乙烯-二乙烯苯(PS/DVB)颗粒。颗粒大小有1.7μm、3μm、5μm、10μm。PS/DVB树脂表面键合有一层高度亲水的纳米级厚度的中性聚合物薄层。疏水的PS/DVB树脂表面完全被这种亲水材料覆盖，从而消除了PS/DVB对抗体蛋白的非特异性吸附，保证了其具有很高的分离效率和生物样品回收率。在亲水层表面化学键合了一层弱阳离子交换基团——羧酸基。运用赛分独有的化学键合技术，离子交换功能基团致密而均匀。
稳定性和性能
由于PS/DVB的表面修饰是完全基于化学键键合，所以Antibodix离子交换柱具有优异的稳定性。
技术参数
Antibodix固定相
弱阳离子交换剂
填料
以高度交联的PS/DVB树脂为内核，表面键合一层致密、纳米厚度的亲水层。亲水层的表面再键合了一层均匀的离子交换功能基团。
粒径
1.7、3、5、10μm
孔结构
无孔
pH稳定性
2-12
操作温度极限
80 ℃
操作压力极限
10 μm粒径为4000 psi
5 μm粒径为6000 psi
3 μm粒径为8,000psi
1.7 μm粒径为10,000psi
流动相兼容性
与水溶液，水与乙腈、丙酮或甲醇的混合物等相容。典型的缓冲液包括磷酸盐、Tris和醋酸盐等。
流速
内径为4.6 mm的色谱柱典型操作流速为0.10-1.0 mL/min。
安全注意事项
Antibodix离子交换柱通常在高压下运行。如果管路连接不紧，将会导致有机溶剂和注入样品的泄漏，从而对操作人员的健康产生影响。一旦发生泄漏，应佩戴适当的手套进行处理。另外当打开色谱柱时还应采取适当的保护措施，以防止微小的高分子颗粒进入呼吸道。
色谱柱安装与操作
色谱柱在运输过程中或在没有使用时，它的两端总是用堵头进行密封。当将色谱柱接入色谱仪器系统时，首先移去两端的堵头。请注意将流动相流动的方向与柱上标记的方向保持一致。除非出于特殊考虑，例如为了清除堵在色谱柱入口端的脏污等而需要将色谱柱反接以进行冲洗时，建议用户在接上色谱柱时一定要遵循柱上标记的方向。由于色谱柱的连接是整个色谱操作过程的一部分，如果密封卡套过紧，
或安装不合适，或者密封卡套与色谱柱端口不匹配，都有可能导致溶液的泄漏。请按照下面步骤将色谱柱与密封卡套相连接，从而将色谱柱接入HPLC系统：
（a）首次使用的管线，请依次将管线接头和密封卡套装在外径1/16”的管线上。密封卡套的宽口端应朝向管线接头。
（b）将管线紧紧插入色谱柱的接口，向前滑动密封卡套和管线接头，并使管线接头的螺纹与色谱柱端口的螺纹相互衔接，然后拧紧管线接头。如果管线为高分子材料，请转到步骤（d）；如果是金属管线，请继续（c）。
（c）在用力将管线压入柱端接口之后，用1/4”扳手将已拧紧的螺帽再进一步紧固。
（d）对色谱柱的另一端采用上述方法进行操作。
样品与流动相
为了避免色谱柱的堵塞，所有样品和溶剂，包括缓冲溶液在内，都必须在使用前用0.45 mm或0.2 mm的滤膜过滤。建议使用预柱滤片（0.5 mm孔径）或保护柱来保护色谱柱。Antibodix离子交换柱可以使用水溶液，或者有机溶剂（如甲醇、乙腈）与水的混合物等来作为流动相。典型的流动相中含有磷酸、醋酸或Tris的钠盐或钾盐。流动相在使用前需要脱气。一个简单的脱气方法是将流动相在由水泵形成的真空下超声5 min。
Antibodix柱和非离子及两性离子洗涤剂相容，但是与阳离子洗涤剂不相容。
色谱柱的保养
运输溶剂新的Antibodix SCX 和WCX柱中的液相是20mM磷酸盐缓冲液（pH 6.0）。
首次使用在储存和运输过程中，填料可能会干涸。这时推荐用10-20倍柱体积的运输溶剂进行冲洗以活化色谱柱。接着可用用户自己选择的流动相冲洗色谱柱。流速由0.1mL/min逐渐升至所需的操作条件，直至基线稳定为止。如果柱压和基线波动较大，这可能是气泡进入了色谱柱中。这时可用较高流速冲洗色谱柱2-5分钟，例如4.6´250mm的色谱柱可采用流速1.0 mL/min。如果流动相的类型或pH与色谱柱中的储存溶剂差异较大，建议将色谱柱先用新的流动相冲洗10倍柱体积。
pH 为了获得优良的分离效果和延长柱的使用寿命，请尽量使用pH在2-12范围内的流动相。
压力 尽管粒径为1.7μm、3μm、5μm、10μm的无孔Antibodix 离子交换柱可分别在高至10,000psi、8,000psi、6,000psi、4,000psi的压力下使用，但正常的操作压力应当低于5,000psi（1.7μm应低于8,000 psi）。长时间在高压下运行可能损坏色谱柱和输液泵。由于压力来源于流速，因此流速将受制于系统所能承受的压力。一般而言，柱压会随着色谱柱使用时间的增加而逐渐增加。压力突然增加预示色谱柱入口端的筛板发生了堵塞。在这种情况下，建议将色谱柱反接后用适宜的溶剂进行冲洗。
温度 操作温度为80°C。为了延长柱的使用寿命，请尽量在10-50°C范围内操作。长时间在高温（>80°C）下操作也会损坏色谱柱，这种情形在高的pH（>12或<2.0）条件下特别突出。
流速范围内径为4.6mm的色谱柱，其正常操作流速为0.1-1.0mL/min。
储藏 长期不用时，请将Antibodix柱保存在20mM磷酸盐缓冲液（pH 6.0）中。色谱柱需要用储存缓冲溶液冲洗至少15倍柱体积。然后再用随色谱柱附上的两个可拆卸的堵头塞紧色谱柱的两端以防止柱床的干涸。
色谱柱的清洗（1）如果预柱滤片或保护柱在分离之前曾经使用过，需要首先将预柱滤片或保护柱反接用清洗溶液冲洗15-30min。如果经过冲洗效果没有得到明显改善，则需要更换预柱滤片或保护柱。清洗溶液为含1.0 M NaCl的50mM磷酸盐缓冲液（pH10）。
（2）在使用过程中，样品经常会被吸附在柱入口端的筛板或者填料上。当样品吸附累积到一定程度时，柱压将会升高，色谱峰形也会出现展宽。这时就需要清洗色谱柱了。下面是色谱柱清洗的基本步骤。
1．将色谱柱与检测器断开；
2．将色谱柱反接后进行冲洗；
3．将流速设置到所推荐的流速的50%进行冲洗。注意柱压的变化。如果柱压超出正常水平许多，则需要降低流速，或选用低粘度的清洗溶液；
4．通常10-15倍柱体积的清洗溶液就足够了。下面将介绍可供选择的清洗溶液。低pH的盐溶液有助于去除碱性蛋白。高pH的盐溶液有助于去除酸性蛋白。有机溶剂可去除疏水蛋白。对于一般的清洗，建议用含1.0 M NaCl的50mM磷酸盐缓冲液（pH10）。
色谱柱的保护
除了需要过滤样品和流动相外，保护色谱柱的方法是在色谱柱前连接保护柱或预柱滤片。预柱滤片可以去除样品或流动相中的残留颗粒，或者从HPLC系统，如泵或进样器垫圈上脱离下来的颗粒。更为有效的方法是使用保护柱，因为它可以除去样品、流动相或者来自于HPLC系统中的具有强吸附能力的样品组分和残留颗粒。
